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赫澎(上海)生物科技有限公司
HePeng(Shanghai)Biotech.,Ltd.
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熒光(RiboGreen)定量檢測試劑盒
產(chǎn)品編號 HPBIO-JM2713
中文名稱: 熒光(RiboGreen)定量檢測試劑盒
英文名稱:
品牌: 赫澎生物HEPENGBIO
規(guī)格型號: 20次
作為RNA染色劑之一的RiboGreen熒光染料與樣品中RNA,包括rRNA、mRNA等結合,產(chǎn)生熒光信號。RiboGreen可以檢測到低達1納克RNA的變化。RNA的微量增加引起熒光信號強度(Intensity)或相對熒光單位(RFU)的顯著增加。其自發(fā)熒光(Autofluorescence)忽略不計,重復性標準差異(Standard Deviation)低,不受樣品化學成分的干擾。
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 
HEPENGBIO染色液(Reagent A)     微升
HEPENGBIO稀釋液(Reagent B)     毫升
HEPENGBIO標準液(Reagent C)          微升
產(chǎn)品說明書                         1份
 
保存方式
 
保存HEPENGBIO染色液(Reagent A)和HEPENGBIO標準液(Reagent C)在-20℃冰箱里,避免反復凍融;其余的保存在4℃冰箱里,HEPENGBIO染色液(Reagent A)避免光照,有效保證6月
 
用戶自備
 
1.5毫升離心管:用于樣品操作的容器
200微升1厘米光徑比色皿或黑色96孔板:用于熒光分析的容器
熒光分光光度儀或熒光酶標儀:用于熒光定量分析
 
實驗步驟
 
一、 測定準備
 
1. 準備好待測樣品,置于冰槽里
2. 設定好熒光分光光度儀:激發(fā)波長485±10nm,散發(fā)波長530±12.5nm,并置零
3. 實驗開始前,將-20℃冰箱里的試劑盒中的HEPENGBIO染色液(Reagent A)置于冰槽里融化。然后移出xx微升HEPENGBIO稀釋液(Reagent B)到新的1.5毫升離心管,加入xx微升HEPENGBIO染色液(Reagent A),混勻后,用錫紙包裹,標記為HEPENGBIO染色工作液(5次測定量),放在暗室里。然后進行下列操作。
 
二、 構建標準曲線
 
1. 準備好5個1.5毫升離心管,標記為1至5號管
2. 分別加入xx微升HEPENGBIO稀釋液(Reagent B)到每個離心管
3. 移取xx微升HEPENGBIO標準液(Reagent C)到1號管,混勻
4. 小心移取xx微升1號管稀釋的HEPENGBIO標準液(Reagent C)到2號管,混勻
5. 小心移取xx微升2號管稀釋的HEPENGBIO標準液(Reagent C)到3號管,混勻
6. 小心移取xx微升3號管稀釋的HEPENGBIO標準液(Reagent C)到4號管,混勻
7. 將1至5號管放進冰槽里備用;標準管含量見下表
 
管號 HEPENGBIO稀釋液(Reagent B) HEPENGBIO標準液(Reagent C) 標準DNA總量
1 xx微升 xx微升 xx納克/毫升
2 xx微升 xx微升1號管 xx納克/毫升
3 xx微升 xx微升2號管 xx納克/毫升
4 xx微升 xx微升3號管 xx納克/毫升
5 xx微升 空對照 0
 
8. 移取xx微升含有HEPENGBIO染色液(Reagent A)HEPENGBIO稀釋液(Reagent B)HEPENGBIO染色工作液到新的比色皿
9. 加入100微升上述配制的標準液
10. 室溫下,孵育5分鐘,避免光照
11. 即刻放進熒光分光光度儀測讀:獲得相對熒光單位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
12. 重復實驗步驟8至11四次
13. 繪制標準曲線:縱座標(Y軸)為相對熒光單位(RLU);橫坐標(X軸)為DNA含量(納克/毫升)
 
三、 樣品檢測
 
1. 移取xx微升含有HEPENGBIO染色液(Reagent A)HEPENGBIO稀釋液(Reagent B)HEPENGBIO染色工作液到新的比色皿
2. 加入100微升待測樣品
3. 室溫下,孵育5分鐘,避免光照
4. 即刻放進熒光分光光度儀測讀:獲得相對熒光單位(Relative Fluorescence Unit;RFU)
5. 根據(jù)標準曲線獲得樣品對應RNA含量(納克/毫升)
檢測報告(COA)
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